高效液相色譜法在食品**檢測中的應用!

食品貿易的全球化使廣大消費者受益，大量高品質、價格合理、**的食品應運而生，滿足著廣大消費者的需要。日趨加速的城市化狀況導致食品的制作、運輸、貯存、銷售需求不斷增加。同時還會有一些不法制假商販制造或販賣偽劣食品，甚至在食品中摻入有毒化學品，給消費者造成極大傷害，這就需要有一套完整的監測監督機制。作為降低食源性危害的有效手段，許多食品**項目正越來越側重于從農田到餐桌的整個過程，雖然國家在保證食品**方面作大量的工作，每年仍有相當數量的消費者因進食受污染的食品而中毒、發病、乃至死亡。當今農產品、食品**已成為世人十分關注的熱門話題，食品**監測面臨著嚴峻挑戰，因此，急需建立快速調查食源性**和監測食品污染的措施和方法。本文就高效液相色譜(HPLC)技術在食品**檢測方法中的應用概況作一綜述。

    食品不**因素及HPLC應用范圍

    據報道，每年世界上發生的食品污染病例在7000萬例以上。食源性**的爆發已引起媒體的廣泛關注和消費者的關心。當前食品中的不**因素主要表現在以下幾個方面[2]：微生物、寄生蟲等生物污染；環境污染；農用、獸用化學物質的殘留；自然界存在的天然**；營養素不平衡；食品加工和貯藏過程中產生的**；食品添加劑的使用；食品摻偽；新開發的食品資源及新工藝產品；包裝材料。食品中*常見的有毒有害物質是有機合成農藥、獸藥殘留物及污染物和致病菌。

    高效液相色譜法(HPLC)是上世紀60年代末70年代初發展起來的一種新型分析分離技術。它是由現代高壓技術與傳統的液相色譜方法相結合，加上高效柱填充物和高靈敏檢測器所發展起來的新型分離分析技術，是以經典液相色譜法為基礎，引入了氣相色譜的理論與實踐方法，流動相改為高壓輸送，采用高效固定相在線檢測手段發展而成的分離分析方法，分離機制是靠被分離組分的分子與流動相分子爭奪吸附表面活性中心的吸附能力差別而分離(可用吸附系數Ka衡量吸附能力的差異)，是現代分離分析的重要手段，隨其分離檢測技術的日益完善，已被廣泛應用于各個學科中。由于它只要求樣品能制成溶液，而不需要氣化，因此不受樣品揮發性的約束。對于揮發性低，熱穩定性差，分子量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為有利，如氨基酸、蛋白質、生物堿、核酸、甾體、脂類、維生素、***等分子量較大，沸點較高的合成**以及無機鹽類。所以說HPLC具有適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復使用、流出組分容易收集、**等優點。世界上約有80%的有機化合物可以用HPLC來分析測定[1]。

    HPLC對食品添加劑及農藥的測定

    蘇丹(Sudan)色素是一種人工合成染料，在化工生產中主要用于對油類、蠟和肥皂的染色。有關研究表明，蘇丹Ⅰ號(Sudan Ⅰ)會導致鼠類患癌，它對人類肝細胞也顯現出可能致癌的特性。李軍[3]等建立了食品中4種蘇丹色素的高效液相色譜同時測定方法。采用乙腈提取后經凝膠滲透色譜法對樣品進行凈化，利用反相高效液相色譜法，以乙腈-酸性水溶液為流動相，采用梯度洗脫，以二極管陣列檢測器定性定量測定食品中的4種蘇丹色素，結果*低檢出限分別為0.102、0.097、0.074、0.099 mg/kg。阿斯巴甜、糖精鈉、乙酰磺胺酸鉀等添加劑對人體有一定的毒害作用。特別是阿斯巴甜，它在體內代謝過程中的主要降解物為苯丙氨酸和天門冬氨酸，對于苯丙酮尿病(PKU)患者，因其代謝缺陷，體內過多的苯丙氨酸可影響患者的發育，所以有該病的患者要禁用添加阿斯巴甜的食品。劉思潔[4]等建立了一種可以同時測定飲料中糖精鈉、乙酰磺胺酸鉀、阿斯巴甜的方法，采用C18反向柱，以乙腈-0.02 mol/L硫酸銨溶液(5∶95)為流動相，在214 nm波長處檢測。結果以上三種甜味添加劑在飲料中*低檢出限為 4 μg/ml。目前蔬菜水果中不同種類農藥的殘留測定方法主要是氣相色譜法(GC)或氣相色譜 -質譜法 (GC-MS )，但GC對沸點高或熱穩定性差的農藥需進行衍生化處理，這樣就不可避免地增加了樣品前處理的難度，也使它的應用受到一定程度的限制。李永新[5]等建立了同時測定蔬菜水果12種農藥殘留的反相高效液相色譜分析方法。將樣品搗碎，用乙酸乙酯超聲提取，經Florisil固相萃取柱凈化、正己烷-二氯甲烷( 1∶1)洗脫、氮氣吹干、甲醇溶解并定容后，采用高效液相色譜柱分離、紫外檢測，以外標法定量。結果表明：5種有機磷農藥、6種擬除蟲菊酯類農藥和除草劑二甲戊樂靈的檢測限為0.114-2.65 ng。應用該法對從市場上隨機購買的蓮白、小白菜、黃瓜等20個蔬菜樣品和

    作者簡介：陸興毅(1975-)，男，廣西田陽縣人，主管藥師，理學士。蘋果、梨等20個水果樣品進行檢測，其中氧化樂果的檢出率分別為55%和45%，辛硫磷的檢出率分別為50%和30%，由此可見，國家明文規定的不得用于蔬菜、瓜果的劇毒、高毒農藥仍有檢出。

    HPLC對食品中獸藥殘留物的測定

    1.鹽酸克侖特羅(俗稱瘦肉精)系β2受體興奮劑，禁止作為畜禽類生長促進劑使用。近年來，我國曾多次報道了因食用含有鹽酸克侖特羅殘留的豬肉及內臟等造成的中毒事件。陳金枝[6]等建立HPLC法測定豬眼 、豬肝 、豬肺中微量鹽酸克侖特羅，樣品經乙醚-丁醇提取，用Hypersil C18色譜柱，甲醇-0.01 moL/L磷酸二氫鉀溶液為流動相。結果樣品中鹽酸克侖特羅*小檢測量為0.20 ng。用該法對市場上豬眼、豬肝、豬肺等30份樣品進行測定，結果在豬肺中的殘留在檢出限以下，豬眼、豬肝中*大殘留分別為0.96、0.22 mg/kg。

    2.磺胺類**是抗感染藥劑，具有**作用，因此在飼料中常常被添加。但是，過量的**殘留會損害人體健康。郭根和[7]等采用反相高效液相色譜法，用C18色譜柱、紫外檢測器，以5 mmol/L NaH2PO4溶液-乙腈溶液為流動相，測定蝦中磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶、磺胺喹惡啉等5種磺胺類**殘留，結果*低檢測限為2 μg/kg，符合痕量測定的要求。

    3.薄海波[8]等采用柱切換直接進樣高效液相色譜法測定蜂蜜中3種四環素類***(土霉素OTC、四環素TC、金霉素CTC)的殘留量，先用緩沖溶液溶解樣品后，直接進樣，以二次蒸餾水作流動相在C18預柱上在線富集和凈化，然后用柱切換閥將預柱與一個C18分析柱接通，以草酸溶液-乙腈-甲醇作流動相，紫外檢測器在350 nm處檢測。結果各組分回收率大于86%，相對標準偏差小于8.0%，*低檢出濃度為0.005 mg/kg，滿足了日本等國對進口蜂王漿中土霉素、四環素、金霉素殘留量(0.05 mg/kg)要求。

    4.孔雀石綠、結晶紫屬三芳基甲烷化學物質，長期以來許多國家曾將其作為水產養殖業的**劑，可用于魚類高發的水霉病、原蟲病的控制，但是進一步研究證實，孔雀石綠等進入人類或動物機體后，通過生物轉化可產生致癌、致畸、致突變等副作用 ......